送风中微生物检验方法

本附录规定了集中空调通风系统送风中细菌总数、真菌总数和b-溶血性链球菌的检验方法。

D1 送风中细菌总数

D1.1原理

用仪器法采集集中空调通风系统送风中的细菌，计数在营养琼脂培养基上经35~37℃、48小时培养所形成的菌落数，以每立方米空气中菌落形成单位（cfu/m3）报告。

D1.2 方法与要求

D1.2.1采样点：一般设在距送风口下风方向15~20cm处。

D1.2.2 采样环境条件：采样时集中空调通风系统必须在正常运转条件下，并关闭门窗1小时以上，尽量减少人员活动幅度与频率，记录室内人员数量、温湿度与天气状况等。

D1.2.3 采样方法

以无菌操作，使用六级筛孔空气撞击式采样器，以空气流量为28.3L/min，在采样点采集5-15min。

D1.3 培养

D1.3.1 营养琼脂培养基

成分：         蛋白胨                10g

                   氯化钠                 5g

                   肉膏                   5g

                   琼脂                  20g

                   蒸馏水             1000ml

制法：将蛋白胨、氯化钠、肉膏溶于蒸馏水中，校正pH值为7.2～7.6，加入琼脂，121℃ 20min灭菌备用。

D1.3.2 方法：将采集细菌后的营养琼脂平皿置35~37℃培养48小时，计数菌落数，记录结果并换算成cfu/m3。

D2 送风中真菌总数

D2.1 原理

用仪器法采集集中空调通风系统送风中的真菌，计数在沙氏琼脂培养基上经28℃、5～7天培养所形成的菌落数，以每立方米空气中菌落形成单位（cfu/m3）报告。

D2.2方法与要求

D2.2.1采样点与D1.2.1款要求相同。

D2.2.2 采样环境条件：采样时集中空调通风系统必须在正常运转条件下，并关闭门窗1小时以上，尽量减少人员活动幅度与频率，记录室内装修状况、人员数量、温湿度与天气状况等。

D2.2.3 采样方法同D1.2.3

D2.3 培养

D2.3.1 沙氏（Sabourand’s agar）琼脂培养基

成分：         蛋白胨                10g

                   葡萄糖                40g

                   琼脂                  20g

                   蒸馏水             1,000ml

制法：将蛋白胨、葡萄糖溶于蒸馏水中，校正pH值为5.5～6.0，加入琼脂，115℃ 15min灭菌备用。

D2.3.2方法：将采集真菌后的沙氏琼脂培养基平皿置28℃培养5~7天，逐日观察并于第7天记录结果。若真菌数量过多可于第5天计数结果，并记录培养时间，换算成cfu/m3。

D3 送风中b-溶血性链球菌

D3.1  原理

用仪器法采集集中空调通风系统送风中的b-溶血性链球菌，经35～37℃，24～48小时培养，在血平皿平板上形成典型菌落的为b-溶血性链球菌。以每立方米空气中菌落形成单位（cfu/m3）报告。

D3.2 方法与要求

D3.2.1采样点与D1.2.1款要求相同。

D3.2.2 采样环境条件：采样时集中空调通风系统必须在正常运转条件下，并关闭门窗1小时以上，尽量减少人员活动幅度与频率，记录室内人员数量。

D3.3 培养 

D3.3.1 血琼脂平板

成分：                蛋白胨                10g

                            氯化钠                 5g

                            肉膏                   5g

                            琼脂                  20g

                            脱纤维羊血         5~10 ml

                            蒸馏水             1,000ml

制法：将蛋白胨、氯化钠、肉膏加热溶化于蒸馏水中，校正pH值为7.4~7.6，加入琼脂，121℃ 20min灭菌。待冷却至50℃左右，以无菌操作加入脱纤维羊血，摇匀倾皿。

D3.3.2 方法：采样后的血琼脂平板在35～37℃下培养24～48h。

D3.4 结果观察

培养后，在血平皿平板上形成呈灰白色，表面突起直径0.5~0.7mm的细小菌落，菌落透明或半透明，表面光滑有乳光；镜检为革蓝氏阳性无芽孢球菌，圆形或卵圆形，呈链状排列（视培养与操作条件影响链可短可长4~8个细胞至几十个细胞）；菌落周围有明显的2～4mm界限分明、完全透明的无色溶血环。符合上述特征的菌落为b-溶血性链球菌。